一、實驗目的要求
1、進一步加強學習、掌握玻璃瓶、試劑瓶的清洗、烘干、包扎的包扎技術。
2、為下一次的玻璃瓶、試劑瓶_的準備工作。
二、原理
為確保實驗順利地進行，要求把實驗所用的玻璃瓶清洗干凈。為保持_后和無菌狀態(tài)，需要對培養(yǎng)皿、吸管等進行包扎，對試管和三角瓶等加塞棉塞。這些工作看起來很普通簡單，但如操作不當或不安操作規(guī)定去做，則會影響實驗結果，甚至會導致試驗的失敗。
_原理：高壓蒸汽_是將待_的物品放在一個密閉的加壓_鍋內(nèi)，通過加熱，使_鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡，然后關閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時由于蒸汽不能溢出，而增加了_器內(nèi)的壓力，從而使沸點增高，得到高于100℃的溫度。導致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達到_的目的。適用于一般培養(yǎng)基、玻璃瓶、試劑瓶、無菌水、金屬用具。一般培養(yǎng)基在121．3℃_20分鐘即可。干熱_是利用高溫使微生物細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達到_的目的。細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固性與其本身的含水量有關，在菌體受熱時，當環(huán)境和細胞內(nèi)含水量越大，則蛋白質(zhì)凝固_越快，反之含水量越小，凝固緩慢。因此，與濕熱_相比，干熱_所需溫度高（160—170℃），時間長（1—2小時）。但干熱_溫度不能_180℃，否則，包器皿的紙或棉塞_會烤焦，甚至引起燃燒，因而一般塑料制品不能用干熱_。
三、試劑瓶和儀器
（一）儀器
高壓蒸汽_鍋、電熱烘箱、試管、三角瓶、培養(yǎng)皿和吸管、棉線、紗布、棉花、牛皮紙、報紙、硅膠塞等
四、實驗內(nèi)容
?。ㄒ唬┎Ａ?、試劑瓶的清洗：
新購的玻璃器皿的洗滌
將器皿放入２％鹽酸溶液中浸泡數(shù)小時，以除去游離的堿性物質(zhì)，_后用流水沖凈。
對容量較大的器皿，如大燒瓶、量筒等，洗凈后注入濃鹽酸少許，轉動容器使其內(nèi)部表面均沾有鹽酸，數(shù)分鐘后傾去鹽酸，再以流水沖凈，倒置于洗滌架上晾干，即可使用。
常用舊玻璃器皿的洗滌
確實無病原菌或未被帶菌物污染的器皿，使用前后，可按常規(guī)用洗衣粉水進行刷洗；
吸取過化學試劑的吸管，先浸泡于清水中，待到_數(shù)量后再集中進行清洗。
帶菌玻璃器皿的洗滌
凡實驗室用過的菌種以及帶有活菌的各種玻璃器皿，_經(jīng)過高溫_或消毒后才能進行刷洗：
1、帶菌培養(yǎng)皿、試管、三角瓶等物品，做完實驗后放入消毒桶內(nèi)，用0.1MPa_20～30min后再刷洗。含菌培養(yǎng)皿的_，底蓋要分開放入不同的桶中，再進行高壓_。
2、帶菌的吸管、滴管，使用后不得放在桌子上，立即分別放入盛有3～5%來蘇爾或5%石炭酸或0.25%新潔爾滅溶液的玻璃缸（筒）內(nèi)消毒24h后，再經(jīng)0.1MPa_20min后，取出沖洗。
3、帶菌載玻片及蓋玻片，使用后不得放在桌子上，立即分別放入盛有3～5%來蘇爾或5%石炭酸或0.25%新潔爾滅溶液的玻璃缸（筒）內(nèi)消毒24h后，用夾子取出經(jīng)清水沖干凈。
如用于細菌染色的載玻片，要放入50g/L肥皂水中煮沸10min，然后用肥皂水洗，再用清水洗干凈。
_后將載玻片浸入95%酒精中片刻，取出用軟布擦干，或晾干，保存?zhèn)溆谩?br />
若用皂液不能洗凈的器皿，可用洗液浸泡適當時間后再用清水洗凈。
4、含油脂帶菌器材的清洗
單獨高壓_：用0.1MPa_20～30min→趁熱倒去污物→倒放在鋪有吸水紙的籃子上→用100℃烘烤0.5h→用5%的碳酸氫鈉水煮兩次→再用肥皂水刷洗干凈。
（二）、玻璃瓶、試劑瓶的晾干或烘干
不急用的玻璃瓶：可放在實驗室中自然晾干；
急用的玻璃器瓶：把器材放在托盤中（大件的器材可直接放入烘箱中），再放入烘箱內(nèi)，用80～120℃烘干，當溫度下降到60℃以下再打開取出器材使用。
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要_后的玻璃瓶仍保持無菌狀態(tài)，需在_前進行包扎。
?。?）培養(yǎng)皿：洗凈的培養(yǎng)皿烘干后每10套（或根據(jù)需要而定）疊在一起，用牢固的紙卷成一筒，或裝入特制的鐵桶中，然后進行_。
（2）吸管：洗凈、烘干后的吸管，在吸口的一頭塞入少許脫脂棉花，以防在使用時造成污染。塞入的棉花量要適宜，多余的棉花可用酒精燈火焰燒掉。每支吸管用一條寬約4~5cm的紙條，以30~50℃的角度螺旋形卷起來，吸管的_在頭部，另一端用剩余的紙條打成一結，以防散開，標上容量，若干支吸管包扎成一束進行_。使用時，從吸管中間擰斷紙條，抽出試管。
（3）試管和三角瓶：試管和三角瓶都需要做合適的棉塞，棉塞可起過濾作用，避免空氣中的微生物進入容器。制作棉塞時，要求棉花緊貼玻璃壁，沒有皺紋和縫隙，松緊適宜。過緊易擠破管口和不易塞入；過松易掉落和污染。棉塞的長度不小于管口直徑的2倍，約2/3塞進管口。
目前，國內(nèi)已開始采用塑料試管塞，可根據(jù)所用的試管的規(guī)格和試驗要求來選擇和采用合適的塑料試管塞。
若干支試管用繩扎在一起，在棉花部分外包裹油紙或牛皮紙，再用繩扎緊。三角瓶加棉塞后單個用油紙包扎。
?。ㄋ模?、玻璃瓶、試劑瓶的_
_:干熱_:160～165℃烘箱中_2h；或濕熱_:121℃20～30min
u干熱_法
1、將包扎好的玻璃瓶擺入電熱烘箱中，相互間要留有_的空隙，以便空氣流通。
2、關緊箱門，打開排氣孔，接上電源。
3、待箱內(nèi)空氣排出到_程度時，關閉上排氣孔，加熱至_溫度后，固定溫度進行_：160℃—165℃保持2小時。2小時后切斷電源。
4、待烘箱內(nèi)溫度自然降溫冷卻到60℃以下后，再開門取出玻璃器皿，避免由于溫度突然下降而引起玻璃瓶碎裂。
高壓蒸汽_法
1、關好排水閥門，放入純凈水或蒸餾水至標度。注意水量_要加足，否則容易造成事故。
2、將須要_的玻璃瓶、培養(yǎng)基等裝入_鍋中，加蓋密封。旋緊螺旋時，先將每個螺旋旋轉到_程度（不要太緊），然后再旋緊相對的兩個螺旋，以達到平衡旋緊，否則易造成漏氣，達不到__的目的。
3、通電加溫，打開排氣活門，排盡鍋內(nèi)的空氣。通常當壓力表指針升至5磅或0.05MPa時，打開排氣活門放氣，待壓力表指針降至零點一小段時間后，再關閉活門。即活門沖出的全部是蒸汽時則表示_，此時可關閉排氣活門，如果過早關閉活門，排氣不_，也達不到__的目的。
4、恒溫_:0.1MPa或15磅壓力保持20～30分鐘。壓力表的指針上升時，鍋內(nèi)溫度也逐漸升高，當壓力表指針升至0.1MPa時或15磅時，鍋內(nèi)溫度相當于120℃～121℃（等于一個大氣壓），此時開始計算_時間，控制熱源，使處于0.1MPa或15磅壓力保持20～30分鐘，即能達到__的目的，然后停止加溫。當達到所需溫度時開始計時，并在此溫度下保持所需的時間。
5、降溫：自然降溫或打開活門排汽降溫。稍微打開一點排氣活門，使鍋內(nèi)蒸汽緩慢排除，然后逐漸開大活門，氣壓徐徐下降，注意勿使排氣過快，否則會使鍋內(nèi)的培養(yǎng)基沸騰而沖脫或沾染棉花塞，但排氣太慢又使玻璃瓶在鍋內(nèi)，受高溫處理時間過長，對玻璃瓶也是不利的。一般從排氣到打開鍋蓋以10分鐘左右為好。
6、當鍋內(nèi)蒸汽_排盡時即壓力表指針降到零時，要立即打開鍋蓋。
7、取出玻璃瓶：當鍋內(nèi)溫度下降到60℃左右時器材或培養(yǎng)基。如玻璃瓶需制備固體斜面培養(yǎng)基時，則應趁熱將試管斜放在桌上，上面蓋上報紙以免落灰塵，冷卻后便可收起。
8、_后將高壓_器內(nèi)的剩余水排出。
9、觀察_效果。把_玻璃瓶入25℃溫箱中，培養(yǎng)48小時觀察_效果。48小時后不見雜菌生出，便證明玻璃瓶已達到_目的，可以使用。
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